更新日期:2023-12-14
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廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
所在城市:上海市
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
其原理是在末端脫氧核糖核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的作用下,在基因組DNA斷裂時暴露出的3′-羥基(3′-OH)末端摻入生物素(Biotin)標(biāo)志的dUTP,隨后通過Biotin與連接辣根過氧化酶的鏈霉親和素(Streptavidin-HRP)特異結(jié)合,在辣根過氧化酶底物二氨基聯(lián)苯胺(DAB)的存在下,產(chǎn)生深棕色的不溶物,從而特異準(zhǔn)確地定位凋亡的細(xì)胞。
本試劑盒可用于石蠟切片、冰凍切片和細(xì)胞樣本(細(xì)胞涂片或爬片)的凋亡原位檢測,檢測結(jié)果可在普通光學(xué)顯微鏡下直接觀察計(jì)數(shù)。
包裝清單:
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 包裝1 | 包裝2 |
SJ1271 | TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(DAB顯色法) | 20T | 50T |
● | 說明書 | 一份 |
產(chǎn)品組成:
編號 | 組分 | 20T | 50T | 儲存條件 |
試劑(A) | 50× Proteinase K | 20 ul | 100 ul | -20℃ |
試劑(B) | 10 × DNase I Buffer | 100 ul | 500 ul | -20℃ |
試劑(C) | DNase I | 20 ul | 100 ul | -20℃ |
試劑(D) | Equilibration Buffer | 2 ml | 10 ml | -20℃ |
試劑(E) | 5×TdT Enzyme Buffer | 200 ul | 1 ml | -20℃ |
試劑(F) | Recombinant TdT Enzyme | 20 ul | 100 ul | -20℃ |
試劑(G) | Biotin-11-dUTP | 20 ul | 100 ul | -20℃ |
試劑(H) | dATP | 20 ul | 100 ul | -20℃ |
試劑(I) | Streptavidin-HRP | 20 ul | 100 ul | 4℃ |
試劑(J) | DAB-A solution | 1 ml | 5 ml | -20℃ |
試劑(K) | DAB-B solution | 50 ul | 250 ul | -20℃ |
保存條件:
Streptavidin-HRP, 4℃, 其余試劑-20 ℃保存,一年有效。
操作步驟:
1、樣本處理:
a) 石蠟切片:經(jīng)二甲笨、酒精脫蠟,復(fù)水。脫蠟應(yīng)充分。
b) 冰凍切片:流水沖洗,去除OCT包埋膠后,用純水洗3次。
c) 細(xì)胞飛片:用組織固定液固定后,用PBS洗三次,每次5分鐘。1% Triton X-100處理10分鐘,用PBS洗三次,每次5分鐘。
2、蛋白酶消化
將1ul 試劑(A)50× Proteinase K稀釋于50ul PBS中,滴加到組織上,37℃孵育10-20分鐘。消化結(jié)束后,用PBS洗三次,每次5分鐘。
3、封閉
用3%的雙氧水(H2O2)室溫封閉10分鐘,封閉結(jié)束后用PBS洗三次,每次5分鐘。
4、陽性對照組織的處理
將組織用DNase I消化,以獲得斷裂的DNA,即成Tunel染色陽性的對照。陽性對照組織也可以選用小鼠的小腸組織切片。
純水 | 46 ul |
試劑(B): 10 × DNase I Buffer | 5 ul |
試劑(C): DNase I | 1 ul |
共計(jì) | 50 ul |
將50 ul DNase I消化液滴加于組織上,37℃孵育10-30分鐘,消化結(jié)束后,用PBS洗三次,每次5分鐘。
5、連接:
連接反應(yīng)前用50 ul Equilibration Buffer孵育標(biāo)本5-10分鐘。孵育過程中按下表配制連接工作液。去除標(biāo)本上的Equilibration Buffer后,直接滴加50ul 連接工作液,37℃孵育1-2小時,染色結(jié)束后,用PBS洗三次,每次5分鐘。
試劑(D)Equilibration Buffer | 37 ul |
試劑(E)5×TdT Enzyme Buffer | 10 ul |
試劑(F)Recombinant TdT Enzyme | 1 ul |
試劑(G)Biotin-11-dUTP | 1 ul |
試劑(H)dATP | 1 ul |
共計(jì) | 50 ul |
6、標(biāo)志
取1 ul 試劑(I)Streptavidin-HRP加入到50ul PBS 中,混勻后滴加至組織上,37℃避光孵育30分鐘,隨后用PBS洗三次,每次5分鐘。
7、顯色
取50 ul 試劑(J)DAB-A solution 與2.5 ul 試劑(K)DAB-B solution混勻后,滴加至組織上,室溫顯色反應(yīng)30秒至5分鐘。顯色結(jié)束后,用PBS洗三次,每次5分鐘
8、蘇木素復(fù)染
每組織上滴加數(shù)滴Mayer’s蘇木素染色液,染色1-5分鐘,隨后用自來水沖洗反藍(lán),如蘇木素染色過深,可用1%鹽酸酒精溶液分化數(shù)秒,再次反藍(lán);如蘇木素染色過淺,可用蘇木素再次染色,并延長染色時間。
9、封片觀察
經(jīng)梯度酒精脫水,二甲苯透明后,滴加中性樹膠,加蓋玻片封片,光學(xué)顯微鏡下觀察拍照。
注意事項(xiàng):
1、Proteinase K 消化時間需要摸索,冰凍切片 10 min 左右,石蠟切片時間應(yīng)適當(dāng)延長。
2、陰性對照體系:配制連接工作液時用純水替代TdT Enzyme。
3、連接與標(biāo)志反應(yīng)時應(yīng)注意避光。
4、實(shí)驗(yàn)過程中請穿戴手套、實(shí)驗(yàn)服等,做好個人防護(hù)。
備注:
產(chǎn)品信息可能會有優(yōu)化升級,請以實(shí)際標(biāo)簽信息為準(zhǔn)。
本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區(qū)。
為了您的安全和健康,請?jiān)趯?shí)驗(yàn)過程中做好防護(hù)工作。
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